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- Transcription-mediated Amplification (TMA; deutsch auch: transkriptionsvermittelte Amplifikation oder transkription-vermittelte Verstärkungsreaktion) ist eine molekularbiologische Technik zur Bestimmung des Vorhandenseins bestimmter Erbgutsequenzen in einem Material. Amplifikation bedeutet hier die Herstellung vieler Kopien einer in geringer Menge vorhandenen Nukleinsäuresequenz, um sie detektieren zu können. Für die Amplifikation der gesuchten Sequenz (Zielsequenz) werden zwei Enzyme verwendet, die RNA-Polymerase und die Reverse Transkriptase. Die Nutzung dieser zwei Enzyme erklärt die Verwendung des Worts "transkriptionsvermittelt", denn diese Enzyme werden in der Zelle für die Erbgut-Transkription verwendet. Die Technik kann angewandt werden, um sowohl RNS- als auch DNS-Zielsequenzen zu finden. Das Ergebnis der Reaktion ist immer ein RNS-Amplicon. Jedes der neu synthetisierten RNS-Amplicone geht erneut in TMA-Prozess ein und dient damit als Vorlage für eine neue Runde der Replikation, was zu einer exponentiellen Expansion des Ziel-RNS-Amplicons bei der Reaktion führt. Die Reaktion läuft autokatalytisch ab. Nach der Vermehrung der Zielsequenzen werden diese mit einer Oligonukleotidsonde hybridisiert, die ihrerseits chemilumineszent ist. Das Vorhandensein der Zielsequenz wird am Ende also photometrisch, sozusagen durch ein Leuchtsignal des Reaktionsprodukts, festgestellt. Die TMA hat gegenüber der Standardmethode, der Polymerase-Kettenreaktion (PCR), folgende Vorteile: Die Methode benötigt weniger Arbeitsschritte. Die Reaktion benötigt keine Temperaturzyklen, wie die PCR sie benötigt. Statt in einem Thermocycler wird sie in einem Wasserbad oder einem Thermoblock bei etwa 41 °C durchgeführt. Die TMA ist schneller als die PCR, bei der sich die Zahl der Kopien in jedem Zyklus maximal verdoppelt. Die TMA kann zwischen 100 und 1000 Kopien pro Zyklus erzeugen und so innerhalb von 15–30 Minuten eine bis zu 10-Milliarden-fache Erhöhung der Anzahl der Zielsequenzen erzeugen. Zudem kann die TMA eingesetzt werden, um mehrere bzw. viele verschiedene Zielsequenzen gleichzeitig zu suchen. Das Reaktionsprodukt, die RNA, ist außerhalb des Reaktionsgefäßes instabiler als PCR-Produkte, was dazu führt, dass Kreuzkontaminationen bei dem Verfahren seltener sind. Die Methode wurde erstmals 1995 von Kacian und Fultz wissenschaftlich beschrieben und im selben Jahr patentiert (US-Patent: US5399491A). (de)
- Amplificación Mediada por Transcripción (AMT o TMA por las siglas en inglés de Transcription-mediated amplification) es un sistema de amplificación de ácido nucleico isotermo (no cambia la temperatura de ácido nucleico) de tubo único, que utiliza dos enzimas, polimerasa de ARN y transcriptasa reversa o inversa. "La amplificación" significa crear muchas más copias de una hebra de ácido nucleico que estaba presente al principio, para fácilmente detectarla o hacerle pruebas. La amplificación rápida del ARN/ADN objetivo permite a un laboratorio detectar simultáneamente múltiples organismos en un solo tubo solo. La tecnología TMA facilita a un laboratorio clínico ejecutar ensayos de pruebas de ácido nucleico ( Nucleic Acid Test o NAT) para cribado de sangre con menos pasos, menos tiempo de procesamiento y resultados más rápidos. Se utiliza en biología molecular, forénsica, y medicina para la identificación rápida y diagnóstico de organismos patógenos, En contraste con técnicas similares como la reacción de cadena de la polimerasa y la reacción en cadena ligasa, este método implica transcripción de ARN (vía polimerasa de ARN) y la síntesis de ADN (vía transcriptasa inversa) para producir un ARN amplicón (la fuente o producto de amplificación) desde un ácido nucleico objetivo. Esta técnica puede ser usada para apuntar tanto a ARN y ADN. La amplificación mediada por transcripción tiene varias ventajas comparada con otros métodos de amplificación, entre las que se incluyen:
* TMA es isotermo; se utiliza un baño de agua o bloque de calor en vez de un cilindro térmico.
* TMA produce ARN amplicón en vez de ADN amplicón. Dado que el ARN es más lábil en un entorno de laboratorio, esto reduce la posibilidad de arrastrar consigo contaminación.
* TMA produce 100–1000 copias por ciclo (PCR y LCR exponencialmente dobla cada ciclo). Esto resulta en un aumento multiplicado por 10 mil millones pliegue de copias de ADN (o ARN) en aproximadamente 15–30 minutos. (es)
- Transcription-mediated amplification (TMA) is an isothermal (does not change the nucleic acid temperature), single-tube nucleic acid amplification system utilizing two enzymes, RNA polymerase and reverse transcriptase. "Amplification" means creating many more copies of a strand of nucleic acid than was present at first, in order to readily detect it or test it. Rapidly amplifying the target RNA/DNA allows a lab to simultaneously detect multiple pathogenic organisms in a single tube. TMA technology allows a clinical laboratory to perform nucleic acid test (NAT) assays for blood screening with fewer steps, less processing time, and faster results.It is used in molecular biology, forensics, and medicine for the rapid identification and diagnosis of pathogenic organisms. In contrast to similar techniques such as polymerase chain reaction and ligase chain reaction, this method involves RNA transcription (via RNA polymerase) and DNA synthesis (via reverse transcriptase) to produce an RNA amplicon (the source or product of amplification) from a target nucleic acid. This technique can be used to target both RNA and DNA. Transcription-mediated amplification has several advantages compared to other amplification methods including:
* TMA is isothermal; a water bath or heat block is used instead of a thermal cycler.
* TMA produces RNA amplicon rather than DNA amplicon. Since RNA is more labile in a laboratory environment, this reduces the possibility of carry-over contamination.
* TMA produces 100–1000 copies per cycle (PCR and LCR exponentially doubles each cycle). This results in a 10 billion fold increase of DNA (or RNA) copies within about 15–30 minutes. (en)
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- Transcription-mediated Amplification (TMA; deutsch auch: transkriptionsvermittelte Amplifikation oder transkription-vermittelte Verstärkungsreaktion) ist eine molekularbiologische Technik zur Bestimmung des Vorhandenseins bestimmter Erbgutsequenzen in einem Material. Amplifikation bedeutet hier die Herstellung vieler Kopien einer in geringer Menge vorhandenen Nukleinsäuresequenz, um sie detektieren zu können. Für die Amplifikation der gesuchten Sequenz (Zielsequenz) werden zwei Enzyme verwendet, die RNA-Polymerase und die Reverse Transkriptase. Die Nutzung dieser zwei Enzyme erklärt die Verwendung des Worts "transkriptionsvermittelt", denn diese Enzyme werden in der Zelle für die Erbgut-Transkription verwendet. Die Technik kann angewandt werden, um sowohl RNS- als auch DNS-Zielsequenzen zu (de)
- Amplificación Mediada por Transcripción (AMT o TMA por las siglas en inglés de Transcription-mediated amplification) es un sistema de amplificación de ácido nucleico isotermo (no cambia la temperatura de ácido nucleico) de tubo único, que utiliza dos enzimas, polimerasa de ARN y transcriptasa reversa o inversa. "La amplificación" significa crear muchas más copias de una hebra de ácido nucleico que estaba presente al principio, para fácilmente detectarla o hacerle pruebas. La amplificación rápida del ARN/ADN objetivo permite a un laboratorio detectar simultáneamente múltiples organismos en un solo tubo solo. La tecnología TMA facilita a un laboratorio clínico ejecutar ensayos de pruebas de ácido nucleico ( Nucleic Acid Test o NAT) para cribado de sangre con menos pasos, menos tiempo de proc (es)
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