| dbo:abstract
|
- Die Golden-Gate-Klonierung (engl. Golden Gate Assembly) ist eine biochemische Methode zur Klonierung. Sie wurde von entwickelt, um Hochdurchsatz-Klonierungen zu erlauben. Mit Hilfe von Typ IIs-Restriktionsenzymen und T4 DNA-Ligase ist der gleichzeitige Zusammenbau mehrerer DNA-Fragmente in vitro in korrekter Orientierung möglich. Die bei dieser Methode eingesetzten Typ IIs-Restriktionsenzyme, wie , und , schneiden außerhalb ihrer Erkennungssequenz und können daher nicht-palindromische, 4 Basenpaar lange Überhänge generieren, die nach einer Ligation keine Schnittstellen mehr aufweisen. Da die Restriktionsschnittstellen nicht Teil des entstandenen Konstruktes sind, können Restriktionsverdau und Ligation simultan durchgeführt werden. Die Methode wird u. a. für die Herstellung von TALEN für das Genome Editing genutzt. (de)
- Golden Gate Cloning or Golden Gate assembly is a molecular cloning method that allows a researcher to simultaneously and directionally assemble multiple DNA fragments into a single piece using Type IIS restriction enzymes and T4 DNA ligase. This assembly is performed in vitro. Most commonly used Type IIS enzymes include BsaI, BsmBI, and BbsI. Unlike standard Type II restriction enzymes like EcoRI and BamHI, these enzymes cut DNA outside of their recognition sites and, therefore, can create non-palindromic overhangs. Since 256 potential overhang sequences are possible, multiple fragments of DNA can be assembled by using combinations of overhang sequences. In practice, this means that Golden Gate Cloning is typically scarless. Additionally, because the final product does not have a Type IIS restriction enzyme recognition site, the correctly-ligated product cannot be cut again by the restriction enzyme, meaning the reaction is essentially irreversible. A typical thermal cycler protocol oscillates between 37 °C (optimal for restriction enzymes) and 16 °C (optimal for ligases) many times. While this technique can be used for a single insert, researchers have used Golden Gate Cloning to assemble many pieces of DNA simultaneously. (en)
- Сборка Golden Gate, также клонирование Golden Gate (англ. Golden Gate cloning), — метод клонирования ДНК, который позволяет одновременно и упорядоченно собирать несколько фрагментов ДНК в один с помощью эндонуклеаз рестрикции IIs типа и ДНК-лигазы бактериофага T4. Сборка молекулы проводится in vitro. Наиболее часто используемые эндонуклеазы рестрикции типа IIs включают BsaI, BsmBI, and BbsI. В отличие от таких наиболее распространённых рестриктаз, как и , рестриктазы, применяемые для Golden Gate, способны разрезать ДНК вне сайта распознавания и, таким образом, создавать непалиндромные липкие концы. Благодаря возможности получить любой из 256 различных вариантов липких концов длиной 4 пары нуклеотидов становится возможой сборка молекулы ДНК из большого количества фрагментов с использованием комбинаций липких концов. На практике это означает, что последовательность, собранная способом Golden Gate, будет фактически бесшовной. Кроме того, так как последовательность продукта синтеза не несёт сайт распознавания рестриктазы, то, будучи собранным верно, он уже не может быть вновь разрезан ферментами рестрикции. Это означает, что реакция становится фактически необратимой. Обычный протокол амплификатора задаёт температурные колебания от 16 °C (оптимальной для лигаз) до 37 °C (оптимальной для ферментов рестрикции). Этот метод синтеза может быть использован как для одиночной бесшовной вставки, так и для сборки нескольких фрагментов ДНК в одной пробирке. (ru)
- A clonagem Golden Gate ou Golden Gate Assembly é um método de clonagem molecular que permite ao pesquisador montar simultaneamente e direcionalmente vários fragmentos de DNA em uma única peça usando enzimas de restrição do Tipo II e T4 DNA ligasein vitro. As enzimas do Tipo IIS mais comumente usadas incluem BsaI, BsmBI e BbsI. Um protocolo típico de termociclador oscila entre 37°C (ideal para enzimas de restrição) e 16°C (ideal para ligases) muitas vezes. Embora essa técnica possa ser usada para uma única inserção, os pesquisadores usaram a clonagem Golden Gate para montar muitos pedaços de DNA simultaneamente. (pt)
|
| rdfs:comment
|
- Die Golden-Gate-Klonierung (engl. Golden Gate Assembly) ist eine biochemische Methode zur Klonierung. Sie wurde von entwickelt, um Hochdurchsatz-Klonierungen zu erlauben. Mit Hilfe von Typ IIs-Restriktionsenzymen und T4 DNA-Ligase ist der gleichzeitige Zusammenbau mehrerer DNA-Fragmente in vitro in korrekter Orientierung möglich. Die bei dieser Methode eingesetzten Typ IIs-Restriktionsenzyme, wie , und , schneiden außerhalb ihrer Erkennungssequenz und können daher nicht-palindromische, 4 Basenpaar lange Überhänge generieren, die nach einer Ligation keine Schnittstellen mehr aufweisen. Da die Restriktionsschnittstellen nicht Teil des entstandenen Konstruktes sind, können Restriktionsverdau und Ligation simultan durchgeführt werden. Die Methode wird u. a. für die Herstellung von TALEN für (de)
- Golden Gate Cloning or Golden Gate assembly is a molecular cloning method that allows a researcher to simultaneously and directionally assemble multiple DNA fragments into a single piece using Type IIS restriction enzymes and T4 DNA ligase. This assembly is performed in vitro. Most commonly used Type IIS enzymes include BsaI, BsmBI, and BbsI. (en)
- A clonagem Golden Gate ou Golden Gate Assembly é um método de clonagem molecular que permite ao pesquisador montar simultaneamente e direcionalmente vários fragmentos de DNA em uma única peça usando enzimas de restrição do Tipo II e T4 DNA ligasein vitro. As enzimas do Tipo IIS mais comumente usadas incluem BsaI, BsmBI e BbsI. (pt)
- Сборка Golden Gate, также клонирование Golden Gate (англ. Golden Gate cloning), — метод клонирования ДНК, который позволяет одновременно и упорядоченно собирать несколько фрагментов ДНК в один с помощью эндонуклеаз рестрикции IIs типа и ДНК-лигазы бактериофага T4. Сборка молекулы проводится in vitro. Наиболее часто используемые эндонуклеазы рестрикции типа IIs включают BsaI, BsmBI, and BbsI. (ru)
|